DYFAMED /
DYNAPROC (30/04/95 au 02/06/95):	Valérie ANDERSEN (andersen@obs-vlfr.fr)

instrument : ROSETTE : prélèvements bouteilles
paramètres :  PIGMENTS  HPLC 

     ST : numéro de station "DYNxxx" exemple : CTD029=D029
     jour : JJ-mois
     heure : HHhMM heure d'echantillonnage
     profondeur : en metres

     paramètres exprimés en ng/l

     chl c3  chlorphylle c3       	 allo           alloxanthine
     chlc-l  chlorophylle c like  	 diato          diatoxanthine
     chlc12  chlorophylle c1+c2    	zea            zeaxanthine
     fuco-ol fucoxanthinol        	 lut            luteine
     peri    peridinine            		dvchlb         div.chlorophylle b
     19'BF   19' butano-fucox   	chl b          chlorophylle b
     fuco    fucoxanthin           	achla          chlorophylle a allomere
     neox    neoxanthin            	dvchla         div.chlorophylle a
     19'HF   19' hexa-fucox       	chl a          chlorophylle a
     prasi   prasinoxanthine       	chl a'         chlorophylle a'
     diadi   diadinoxanthine       	alpha+beta car alpha + beta carotene
     fuco-l1 fucoxanthine like1   	 Tchla          TOTAL chlorophylle a



PROTOCOLE D'ANALYSE

     HPLC

     Les analyses sont effectuées au laboratoire à partir de 2 litres
     d'eau de mer filtrés sur filtres Whatman GF/F de 25 mm et stockés
     dans de l'azote liquide.

     Les filtres sont plongés dans 5 ml de méthanol et l'extrait mis à
     refroidir pendant une demi-heure à -80°C. Après 10s d'ultrasons,
     celui-ci est clarifié par filtration (GF/C 25 mm). 500 ml de cet
     extrait sont ensuite mélangés à 250 ml de solution tampon
     (Mantoura et Llewellyn, 1983 ; Analytica Chimica Acta, 151, 297-
     ) puis injectés dans le système HPLC.

     L'analyse est effectuée selon la méthode décrite dans Vidussi et
     al. 1996 J. Plankton Res., 18,2377-2382.

     Les conditions degradient sont les suivantes (débit 1 ml min -1)
     :



     T=0 min     75% A  25% B
     T=10 min    50% A  50% B
     T=15 min           100% B
     T=18.5 min         100% B

     Avec solvant A : 70 % méthanol, 30 % de solution acqueuse acétate
     d'ammonium 0.5 N

     Et solvant B : méthanol

     La colonne utilisée est une phase inverse -C8 (RP-C8, Shandon).
     La détection est assurée par deux spectrophotomètres LDC en
     série, un à 440 nm (chlorophylles et caroténoïdes) et un à 667 nm
     (chlorophylles et phaeopigments). L'identification est réalisée
     par comparaison des temps de rétention entre les pics de
     l'échantillon et les temps de rétention de pigments préalablement
     identifiés à partir de cultures algales. Pour un certain nombre
     d'échantillons représentatifs (généralement 2 par site), cette
     identification est confirmée par la comparaison des pectres
     d'absorption (350-700 nm) des différents composés avec ceux de
     pigments préalablement identifiés à partie de cultures. Cette
     procédure utilise un détecteur à barette de diode en série
     (Waters 990) et une librairie spectrale. La quantification des
     différents pigments est réalisée à partir des facteurs de réponse
     des deux détecteurs (440 et 667 nm) qui ont préalablement établis
     par l'injection de quantités connues de différents standards de
     caroténoïdes et de chlorophylles. Ces standards ont été fournis
     par R. Bidigare dans le cadre d'un exercice JGOFS de
     standardisation des méthodes HPLC. Pour les divinyl-chlorophylls
     a et b les coefficients d'extinction utilisés sont ceux décrits
     dans Morel et al. (1993, J. Mar. Res. , 51, 617- ).





responsable :
                       Jean-Claude MARTY (marty@obs-vlfr.fr)